RESUMO O presente estudo avaliou o potencial probiótico in vitro de bactérias ácido-láticas (BAL) isoladas de queijo artesanal da Serra Geral (MG), com 14 e 21 dias de maturação, leite cru e pingo, utilizados em sua elaboração, e de bancadas de produção. As bactérias foram submetidas aos testes de antibiograma, à tolerância a ácido gástrico artificial e a sais biliares e ao antagonismo contra micro-organismos indicadores. Levilactobacillus brevis (Q521) e Lactococcus lactis (LLSG) apresentaram os melhores resultados e foram selecionados para a produção de leite fermentado. Apenas LLSG foi capaz de fermentar o leite. O produto apresentou qualidade microbiológica e físico-química adequada, exceto para os teores de proteína, segundo a legislação vigente para leites fermentados, demonstrando potencial tecnológico. A partir dos resultados apresentados, sugere-se que testes in vivo sejam realizados para que LLSG possa vir a ser utilizado como probiótico.

RESUMO O queijo minas artesanal é produzido por culturas starters endógenas, incluindo bactérias ácido-láticas (BAL). Algumas BAL podem possuir potencial probiótico. Com isso, este estudo teve como objetivo avaliar as propriedades probióticas in vitro de lactobacilos isolados de queijo minas artesanal produzido no estado de Minas Gerais. Dez amostras de lactobacilos, previamente isoladas desses queijos, foram submetidas aos seguintes testes: susceptibilidade aos antimicrobianos, tolerância ao suco gástrico artificial e aos sais biliares, produção de peróxido de hidrogênio e antagonismo contra micro-organismos patogênicos e não patogênicos. Apenas L. plantarum (C0) foi sensível a todos os antimicrobianos testados, enquanto as outras amostras de BAL foram resistentes a, pelo menos, uma droga testada. Seis amostras foram tolerantes ao suco gástrico artificial, e L. brevis (A6) apresentou crescimento nesse meio. Três amostras foram tolerantes aos sais biliares. Apenas L. brevis (E35) produziu peróxido de hidrogênio. Diferença (P<0,05) foi observada entre as médias dos halos de inibição de lactobacilos contra Enterococcus faecalis ATCC 19433 e Lactobacillus plantarum C24 no teste do spot-on-the-lawn. Todas as amostras de lactobacilos inibiram Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enterica var. Typhimurium ATCC 14028 no teste de antagonismo em cocultura (P<0,0001). A maioria das amostras de lactobacilos apresentou potencial probiótico in vitro. Com base nas amostras testadas, L. brevis (A6) apresentou os melhores resultados, considerando-se todos os testes probióticos in vitro.

ABSTRACT Minas artisanal cheese is made from endogenous starter cultures, including lactic acid bacteria (LAB). Some LAB may possess probiotic potential. Thus, this study aimed to evaluate the in vitro probiotic properties of lactobacilli isolated from Minas artisanal cheeses produced in Minas Gerais. Ten samples of lactobacilli, formerly isolated from those cheeses, were submitted to the following assays: antimicrobial susceptibility, tolerance to artificial gastric juice and biliary salts, production of hydrogen peroxide and antagonism against pathogenic and non-pathogenic micro-organisms. Only L. plantarum (C0) was sensitive to all tested antimicrobials, while the other LAB samples were resistant to at least one drug. Six samples were tolerant to artificial gastric juice, and L. brevis (A6) even grew in that medium. Three samples were tolerant to biliary salts. Only L. brevis (E35) produced hydrogen peroxide. Difference (P< 0.05) was observed among the means of inhibition haloes of lactobacilli against Enterococcus faecalis ATCC 19433 and Lactobacillus plantarum C24 in spot-on-the-lawn assay. All samples of lactobacilli inhibited Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enterica var. Typhimurium ATCC 14028 in co-culture antagonism test (P< 0.0001). Most lactobacilli samples showed in vitro probiotic potential. From the tested samples, L. brevis (A6) presented the best results considering all in vitro probiotic tests.

O objetivo deste estudo foi determinar o potencial probiótico in vitro de Lactobacillus spp. isolados de queijos minas artesanais da Serra da Canastra, considerando-se o antagonismo entre amostras isoladas frente a microrganismos indicadores, a susceptibilidade a antimicrobianos, a sensibilidade ao ácido gástrico e a sensibilidade a sais biliares. Todas as bactérias ácido-lácticas testadas apresentaram resistência ao ácido gástrico (pH 2,0) e aos sais biliares (0,3%), bem como atividade antagonista contra Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Salmonella enterica var. Typhimurium, Enterococcus faecalis e bactérias ácido-lácticas isoladas dos próprios queijos - Lactobacillus plantarum (D27) e Lactobacillus rhamnosus (B25). Todas as amostras foram sensíveis à eritromicina e tetraciclina e resistentes à ciprofloxacina, gentamicina, oxacilina, estreptomicina e vancomicina. L. plantarum(B17) apresentou melhor potencial probiótico, pois obteve resultados satisfatórios em todas as propriedades avaliadas. Mais estudos são necessários para verificar a presença e a capacidade de transmissão de genes de resistência antimicrobiana a outros microrganismos e para avaliar o potencial dos microrganismos in vivo. As bactérias selecionadas poderão ser utilizadas na elaboração de queijos em que sejam mantidos o sabor e a tradição do queijo minas artesanal do estado de Minas Gerais.

The aim of this study was to determine some in vitro probiotic features of Lactobacillus spp. isolated from Minas artisanal cheese from Serra da Canastra in order to select some bacteria for future production of safer cheeses keeping their natural flavor and tradition. The evaluated properties were antagonism against indicator microorganisms, antimicrobial susceptibility and also sensitivity to gastric acid and to bile salts. All lactic acid bacteria tested were resistant to gastric acid (pH 2.0) and bile salts (0.3%). Antagonistic activities were detected against Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Salmonella entericavar. Typhimurium, Enterococcus faecalisand other lactic bacteria isolated from the same cheese - Lactobacillus plantarum (D27) and Lactobacillus rhamnosus (B25). All samples were sensitive to the antimicrobials erythromycin, tetracycline and resistant to ciprofloxacin, gentamycin, oxacillin, streptomycin and vancomycin. L.plantarum (B17) presented the best probiotic potential. Further studies are needed to verify the presence and the capacity of transmission of antimicrobial resistance genes to other microorganisms and evaluate the in vivo probiotic potential of the selected microorganisms.

Espécies de bactérias ácido-lácticas foram identificadas em nível molecular em leite das raças ovinas Lacaune, Santa Inês e suas mestiças, e o seu potencial probiótico in vitro foi avaliado. As espécies identificadas foram Enterococcus faecium (56,25%), E. durans(31,25%) e E. casseliflavus (12,5%). Nenhuma outra espécie de bactéria ácido-láctica, como Lactobacillussp., foi identificada. A maioria dos enterococos isolados foi resistente ao pH gástrico (2.0) e a 0,3% de oxgall. Todos os enterococos testados foram resistentes à ceftazidima, oxacilina e estreptomicina e sensíveis à clindamicina, eritromicina e penicilina. A resistência à ciprofloxacina, gentamicina, tetraciclina e vancomicina variou entre as amostras. Todos os enterococos testados inibiram fortemente (P<0,05) Escherichia coli e Listeria monocytogenes, inibiram moderadamente E. faecalis e Staphylococcus aureus e não inibiram Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica var. Typhimurium e uma amostra de E. duransisolada de leite de ovelha. Quatro amostras de E. faecium, uma de E. durans e uma de E. casseliflavus apresentaram o melhor potencial probiótico.

Lactic acid bacteria species were molecularly identified in milk from Lacaune, Santa Inês and crossbred sheep breeds and their in vitro probiotic potential was evaluated. The species identified were Enterococcus faecium (56.25%), E. durans (31.25%) and E. casseliflavus (12.5%). No other lactic acid bacteria species, such as lactobacilli, was identified. Most of the isolated enterococci were resistant to gastric pH (2.0) and to 0.3% oxgall. All tested enterococci were resistant to ceftazidime, oxacillin and streptomycin and sensible to clindamycin, erythromycin and penicillin. The resistance to ciprofloxacin, gentamicin, tetracycline and vancomycin varied among tested species. All tested enterococci strongly inhibited (P<0.05) Escherichia coli and Listeria monocytogenes, moderately inhibited E. faecalis and Staphylococcus aureus and did not inhibit Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica var. Typhimurium and also one E. durans sample isolated from sheep milk. Four samples of E. faecium, one of E. durans and one of E. casseliflavus presented the best probiotic potential.

O potencial probiótico in vitro de Lactobacillus spp. foi avaliado em leites fermentados comercializados em Belo Horizonte, MG, Brasil. Das amostras analisadas, 86,7% apresentaram quantidade mínima de 106UFC/mL de Lactobacillus spp., enquadrando-se no padrão brasileiro de qualidade de leites fermentados. Além disso, 56,7% apresentaram quantidade mínima de 108a 109UFC/mL, estando em conformidade com os parâmetros legais vigentes. As demais 43,3% não estariam aptas a garantir satisfatoriamente efeitos benéficos aos consumidores. Observou-se variação na quantidade de Lactobacillus spp. entre lotes dos produtos, o que pode indicar falhas no monitoramento durante a fabricação, transporte ou estocagem destes. Todas as amostras de Lactobacillus spp. demonstraram alguma atividade inibitória frente aos microrganismos indicadores, sendo mais intensa contra microrganismos patogênicos que não patogênicos (P<0,05). As amostras de Lactobacillus spp. apresentaram diferentes perfis de susceptibilidade aos antimicrobianos, ocorrendo casos de multirresistência. Todas as amostras testadas apresentaram sensibilidade in vitro a sais biliares (0,3%) e resistência in vitro ao pH gástrico (2,0). Lactobacillus spp. dos leites fermentados testados deveriam estar presentes em quantidades mais elevadas em algumas marcas comerciais, possuir resistência aos sais biliares e não apresentar resistência múltipla aos antimicrobianos.

The potential of in vitro probiotic Lactobacillus spp. was evaluated in fermented milks marketed in Belo Horizonte, MG, Brazil. Of the samples analyzed, 86.7% had at least 10(6) CFU/mL of Lactobacillus spp., complying with the Brazilian quality standards for fermented milks. Furthermore, 56.7% had minimum count ranging from 10(8) to 10(9) CFU/mL, which is in accordance with legal parameters. The remaining 43.3% would not be able to satisfactorily guarantee benefits to consumers. The amount of Lactobacillus spp. varied between batches of products, which may indicate failures in monitoring during manufacture, transport or storage. All strains of Lactobacillus spp. showed some inhibitory activity against the indicator microorganisms, being more pronounced against pathogenic microorganisms than against non-pathogenic (P<0.05). Samples of Lactobacillus spp. showed different profiles of antimicrobial susceptibility, with an occurrence of cases of multidrug resistance. All strains tested showed sensitivity to bile salts (0.3%) and resistance to gastric pH (2.0). Lactobacillus spp. of commercial fermented milks should be present in higher amounts in some brands, be resistant to bile salts and have no multiple resistance to antimicrobials.